Ponovljivost priprave vzorcev

Vse vzorce testiranih izdelkov smo pripravili v treh paralelah, izračunali povprečni odziv in SD, ponovljivost priprave vzorcev pa smo podali z RSD. V Preglednici XIV so predstavljeni reprezentativni primeri proučevanih vitaminov v izbranih KI. Ker je RSD pri vseh vzorcih

< 5 %, lahko zaključimo, da je postopek priprave vzorcev ponovljiv. Ponovljivost vseh testiranih vzorcev KI kot SD pa je razvidna iz Preglednice PIII (Priloga).

Preglednica XIV: Rezultati ponovljivosti priprave izbranih vzorcev KI, podani kot RSD, n=3.

Okrajšava KI Povprečni odziv SD RSD [%]

Pri pregledu trga smo ugotovili, da so vitamini B-kompleksa zelo pogosto zastopani v t.i.

aktivni kozmetiki, torej kozmetiki, ki ima na koži učinkovito delovanje. Da KAS lahko delujejo, morajo prodreti v kožo, kar pa je pogojeno tudi z dolžino izpostavitve KI. Zatorej smo izbor KI zožili na izdelke, ki po nanosu ostanejo na koži. V aktivni kozmetiki sta najpogosteje zastopana vitamina B3 in B5, občasno pa se najdeta tudi vitamina B6 in B12, zato so vsi ti vitamini (v podobno pogosti pojavnosti kot na trgu), zastopani tudi v naboru izdelkov (Preglednica PI, Priloga). Izbrali smo tudi nekaj izdelkov z deklarirano vsebnostjo vitaminov, da smo lahko primerjali ugotovljeno vsebnost z navedeno vsebnostjo (G&G, BEP, BEP1, THEO, REXN, LRPCS, REV, MABX, PCN) (vse okrajšave izdelkov so podane v prilogi, v Preglednici I). V izboru izdelkov so tako predstavniki poltrdnih kot tekočih izdelkov. Vključili smo tudi izdelke s pretečenim rokom uporabe (EUC, BEP, BEPD, EUB),

Povprečni odziv

B3 metoda 1 B5 metoda 1 B12 metoda 2

Standard 612381078 135911337 410320

Vzorec 1040147648 193809952 289676

Vzorec + standard 1647014940 333846726 680454

Izkoristek [%] 99,1 104,5 95,2

24

izdelke različnih proizvajalcev in več izdelkov istega proizvajalca (LRPLi, LRPTO, LRPT, LRPC, LRPCS, LRPCG, LRPHS, LRPHY; REXN, REXR; AFRS, AFRT, AFYP; PCAA, PCN; CIE24, CIEQ10; BALQ10, BALV; BEP, BEP1, BEPD; SKINS, SKINT; DARH, DARI). Ker smo želeli preveriti, če obstaja povezava med ceno KI in vsebnostjo vitaminov B-kompleksa, smo z izborom izdelkov pokrili širok razpon cen (od 0,5 do 120€/50 mL KI).

4.3.2 Razvoj ekstrakcijskega postopka

Pri razvoju ekstrakcijskega postopka (postopek opisan v poglavju 3.5.1) smo najprej preverjali vpliv različnih topil in njihovih zmesi v različnih razmerjih na ekstrakcijo proučevanih vitaminov iz izbranih poltrdnih izdelkov. Rezultati, podani relativno glede na uporabo MeOH kot ekstrakcijskega topila (odziv vzorca v MeOH predstavlja 100 %), so predstavljeni v Preglednici XV. Na osnovi pridobljenih rezultatov lahko ugotovimo, da z uporabo topil MQ ali MeOH dosežemo najboljšo ekstracijo. Zmes heksana in vode smo izločili, saj so rezultati primerljivi ali slabši v primerjavi z MQ in MeOH, sam ekstrakcijski postopek pa je kompleksnejši in časovno bolj zamuden. ACN posamezno, ali v kombinaciji z MQ ali MeOH, je tudi manj ustrezen. Z uporabo ekstrakcijskih topil, ki vsebujejo ACN, ne dosežemo popolne ekstrakcije proučevanih vitaminov, poleg tega je ACN neustrezen tudi s kromatografskega vidika, saj se ob tr analitov pojavijo interference v kromatogramih (priloga, Slika P8).

Preglednica XV: Rezultati uporabe različnih topil pri razvoju ekstrakcijskega postopka za poltrdne izdelke, podani relativno (%) glede na topilo MeOH. Z zeleno barvo sta označeni topili, ki smo ju izbrali za nadaljnjo proučevanje na širšem naboru izdelkov.

*v kromatogramu so bile prisotne interference

Na osnovi zgornjih rezultatov smo ugotovili, da sta najustreznejši topili MQ in MeOH, zato smo nadalje za vsak izdelek izbrali enega od obeh ekstrakcijskih topil. Primerjavo med MQ

25

in MeOH smo pri tekočih KI izvedli še na izdelku G&G, kjer so bili rezultati primerljivi (razlika v izkoristku 0,7 %) (Preglednica XVI). Zato smo se pri tekočih izdelkih odločili, da je za njih primerno topilo MQ, glede na to, da vsebujejo velik delež vode. Obe izbrani topili smo nato preverili tudi na večjem številu ostalih poltrdnih izdelkov, pri čemer smo topilo za večino izdelkov izbrali individualno. Pri izdelkih iste znamke in podobne sestave pa smo uporabili topilo, ki se je prej izkazalo kot optimalno. Kot je razvidno iz Preglednice XVI, je MeOH boljša izbira za vse izdelke, razen za KI RB6.

Pri tekočih izdelkih smo opazili težave s ponovljivostjo priprave vzorcev, zato smo vzorce KI PCN, AFRT, THEO, REXN, MABX in G&G najprej pripravili z natehtano maso 10 mg, potem pa še s 25 mg. Iz Preglednice XVI je razvidno, da je pri vseh preizkušenih izdelkih ponovljivost boljša pri večji zatehani masi, zato smo to v nadaljevanju uporabili. Vzorec KI G&G smo pripravili tudi z/brez predhodnega vorteksiranja izdelka v ovojnini. Rezultati v Preglednici XVI kažejo, da predhodno vorteksiranje KI ne zagotavlja boljše ponovljivosti, ampak jo celo poslabša. Ker je ekstrakcija analita primerljiva, predhodnega vorteksiranja nadalje nismo izvajali. Končni postopek priprave vzorcev je opisan v poglavjih 3.5.2 in 3.5.3.

Preglednica XVI: Primerjava ponovljivosti priprave vzorca pri tekočih KI z natehtanima dvema različnima masama (levo) in učinkovitosti predhodnega vorteksiranja KI ter primerjava MeOH in MQ kot ekstrakcijskih topil (odziv, kjer je za ekstrakcijsko topilo uporabljen MeOH predstavlja 100%) pri tekočem (G&G) in poltrdnih KI (desno). Z zeleno barvo je označen postopek, ki smo ga izbrali.

KI RSD [%] KI MeOH MQ

4.3.3 Vrednotenje vsebnosti vitaminov v izbranih kozmetičnih izdelkih

4.3.3.1 Kvalitativno vrednotenje vsebnosti

Razvito analizno metodologijo (metodo UHPLC in ekstrakcijske postopke) smo v nadaljevanju uporabili za analizo izbranih komercialno dostopnih izdelkov z vitamini

B-26

kompleksa na slovenskem trgu. Pri tem smo najprej ugotavljali, ali so navedeni vitamini (oblike vitaminov) prisotni v izdelkih. Neujemanje smo ugotovili pri enem izdelku (2,7 % testiranih izdelkov) (MISS), ki navaja prisotnost vitamina B7, ki ga ob vizualnem pregledu kromatogramov, pri valovni dolžini 210 nm, v KI nismo zaznali (ob tr 10,5 min v kromatogramu ni bilo nobenega kromatografskega vrha). To je lahko posledica dodane minimalne količine vitamina, ki je prenizka za zaznavo, njegove nestabilnosti, ali pa vitamina v izdelek sploh niso dodali.

4.3.3.2 Kvantitativno vrednotenje vsebnosti

Kakovost KI smo lahko ovrednotili z vidika vsebnosti vitaminov B-kompleksa za tiste izdelke, ki imajo navedeno vsebnost. Ker nas je zanimala tudi povezava s ceno oz., ali je mogoče najti cenovno ugodne izdelke z veliko vsebnostjo preiskovanih vitaminov, smo analizirali izdelke s ceno od 0,5 do 120 €/50 mL KI. Testirali smo 37 vzorcev izdelkov, ki smo jih pripravili po postopkih opisanih v poglavjih 3.5.2 in 3.5.3. Rezultati analiz in povezava s ceno za 50 mL izdelka so predstavljeni na Sliki 8 in v Preglednici PIII v prilogi.

Slika 8: Ugotovljene vsebnosti vitaminov B-kompleksa v izbranih KI različnih cen (cena je podana za 50 mL izdelka).

27

Vsebnost vitamina B3 smo določili v 15 izdelkih. Razpon ugotovljenih vsebnosti je bil 0,030 – 11,217 % (m/m), najpogosteje med 2 in 4,5 % (m/m). Na osnovi tega lahko ugotovimo, da je vitamin B3 v KI večinoma (razen pri 2 KI) prisoten v koncentracijah, za katere glede na literaturne podatke pričakujemo, da bodo imele določen učinek na koži. Dermalni nanos KI s 3 % (m/m) niacinamida namreč poveča hidrofobnost in izboljša barieno funkcijo rožene plasti, 5 % (m/m) pa zmanjša porumenelost, rdečico, gubanje kože in hiperpigmentirane pege na obrazu (12, 40).

Največjo vsebnost vitamina B3 smo ugotovili pri treh KI različnih cenovnih skupin: PCN (11,217 % (m/m), 120€/50 mL KI), SKINT (10,145 % (m/m), 37€/50 mL KI) in REV (10,184 % (m/m), 17€/50 mL KI). Najboljše razmerje med vsebnostjo vitamina in ceno ima izdelek REV. Med KI, s ceno nižjo od 5€/50 mL KI, najbolj izstopa LRPLi, ki je z vsebnostjo B3 4,325 % (m/m) zelo cenovno dostopen. Najmanjšo vsebnost vitamina pa imata BALV (0,030 % (m/m)) – kar je pričakovano, saj spada med cenejše izdelke in FRE (0,045 % (m/m)), za katerega bi pričakovali, da bo vsebnost večja, glede na višjo ceno.

Vsebnost vitamina B5 smo ugotavljali v 27 izdelkih. Ugotovljene vsebnosti so bile 0,141 – 5,191 % (m/m), najpogosteje med 0,4 in 1,5 % (m/m). Vitamin B5 je v KI na splošno prisoten v nižjih koncentracijah kot vitamin B3. Ugotovoljeni % (m/m) vitamina B5 v izdelkih pa so glede na literaturne podatke o učinkovitem vlaženju kože pri 1 % (m/m) (41) v večjem številu izdelkov dovolj visoke za njegovo delovanje. Največjo vsebnost vitamina B5 imajo izdelki (različnih cenovnih razredov) THEO (5,191 % (m/m)), BEP1 (5,053 % (m/m)), EUC (5,038 % (m/m)), LRPHY (5,005 % (m/m)), LRPCS (4,987 % (m/m)), G&G (4,980 % (m/m)), LRPCG (4,846 % (m/m)), LRPC (4,817 % (m/m)) in BEP (4,814 % (m/m)) (priloga, Preglednica PIII). Najboljše razmerje med vsebnostjo in ceno smo ugotovili pri KI G&G in EUC, ki sta iz nižjega cenovnega območja (manj kot 5€/50mL KI). KI EUC tako veliko vsebnost vzdržuje še 1 leto po RU, kar kaže na ustrezno formulacijo izdelka. Najmanjša vsebnost vitamina pa je bila ugotovljena pri izdelku višjega cenovnega razreda SKINT (0,141 % (m/m)).

Med izdelki s kombinacijo vitaminov B3 in B5 izstopata izdelka iz višjega cenovnega razreda z navedeno vsebnostjo vitamina B3 (10 %) PCN in SKINT, pri katerih je tudi vsebnost B5

kar visoka (0,254 % (m/m) PCN, 0,141 % (m/m) SKINT) (priloga, Preglednica PIII). Izdelka s kombinacijo obeh vitaminov in še večjo vsebnostjo vitamina B5, (MISS (B3: 2,435 % (m/m), B5: 0,775 % (m/m)) in RIL (B3: 2,254 % (m/m), B5: (1,054 % (m/m))) pa prihajata iz cenovno dostopnejših razredov (MISS 10€/50 mL KI, RIL 17€/50 mL KI). Ker MISS

28

vsebuje še vitamin B12 (0,00088 % (m/m)), bi ga z vidika cene in vsebnosti vitaminov priporočali, vendar smo pri tem izdelku opazili neskladnost pri označevanju, saj dodatno navedenega vitamina B7 nismo zaznali.

RB6 je bil edini testirani izdelek, ki vsebuje vitamin B6. Kot je razvidno iz Preglednice PIII v prilogi, je bila njegova vsebnost 0,557 % (m/m).

V splošnem smo pri vrednotenju vsebnosti vitaminov B-kompleksa v izbranih izdelkih ugotovili, da med ceno in vsebnostjo vitaminov v izdelkih ni povezave, saj ni nujno, da cenejši izdelki vsebujejo manj vitaminov in obratno. Na ceno namreč vplivajo tudi druge prisotne KAS, ostale sestavine in formulacija izdelka, narekuje pa jo tudi znamka izdelka.

Opazili smo tudi podobnost med vsebnostjo istih vitaminov v različnih izdelkih enakega proizvajalca (priloga, Preglednica PIII):

o B5 – DARH (0,480 % (m/m)) in DARI (0,460 % (m/m)); AFYP (0,611 % (m/m)) in AFRT (0,577 % (m/m)); CIE24 (0,526 % (m/m)) in CIEQ10 (0,515 % (m/m)); LRPC (4,817 % (m/m)), LRPCS (4,987 % (m/m)), LRPCG (4,846 % (m/m)), LRPHS (4,427 % (m/m)) in LRPHY (5,005 % (m/m)).

o B3 – LRPTO (2,199 % (m/m)) in LRPT (2,136 % (m/m)).

4.3.3.3 Primerjava med navedeno in ugotovljeno vsebnostjo vitaminov

Na trgu KI se povečuje število izdelkov, ki kvantitativno navajajo vsebnost aktivnih sestavin.

Zaradi nezadostne kontrole pa se navedb na ovojnini ne preverja. Kontrola kakovosti hidrofilnih vitaminov z ugotavljanjem njihovih vsebnosti v KI je bila po dostopnih podatkih izvedena samo za vitamin C in njegove derivate (37). Podobne študije za vitamine B-kompleksa pa nismo zasledili. Kakovost KI smo zato preverjali na izdelkih z navedenim % vsebovanega vitamina. Vsebnost je bila deklarirana pri devetih od 37 testiranih izdelkov:

G&G, BEP, BEP1, THEO, REXN, LRPCS, REV, MABX, PCN (priloga, Preglednica PI).

Vzorce izdelkov smo pripravili po postopkih 3.5.2 in 3.5.3. Na Sliki 9 so predstavljeni rezultati.

29

Slika 9: Primerjave navedene in ugotovljene vsebnosti (z SD-ji) vitaminov B3 in B5 v izbranih KI.

Rezultati vrednotenja vsebnosti B vitaminov dobro korelirajo z navedbami na ovojnini – pri 6 od 9ih izdelkov so odstopanja znotraj 5 %. Pri ostalih treh pa so ugotovljene vsebnosti od navedenih odstopale za več kot 10 %. Odstopanje je bilo največje pri REXN in MABX, kjer je bila ugotovljena vsebnost vitamina B3 le 45,9 % (REXN) in 56,5 % (MABX) navedene.

Manjša vsebnost vitamina je lahko posledica slabše stabilnosti vitamina v izdelku, neustreznega proizvodnega procesa (neupoštevanja dobre proizvodnje prakse) ali pa namernega dodajanja manjše količine vitamina. Pri enem izdelku (PCN) pa smo ugotovili večjo vsebnost od navedene (112,2 %). Najverjetnejši razlog za uporabo prebitkov je neustrezna stabilizacija nestabilnih analitov v izdelkih oz. za nadomeščanje izgub (razgradnja) nestabilnih sestavin tekom RU KI, kar je uveljavljena praksa na področju vitaminskih izdelkov (42, 43). To nam potrjuje tudi predhodna raziskava, kjer so pri 2 izdelkih enakega proizvajalca potrdili nestabilnost vitaminov (retinoidov) oz. neustrezne formulacije z vidika zagotavljanja stabilnosti (44). Opazna je tudi razlika med vitaminoma B3 in B5, saj so bile ugotovljene vsebnosti za vitamin B3 med 45,9 in 112,2 % deklarirane, medtem ko so ugotovljene vsebnosti za vitamin B5 ustrezne (odstopanja od navedb za manj kot 5 %). Največje odstopanje od navedene vsebnosti za vitamin B5 smo zaznali pri izdelku BEP (96,3 %), kar je kljub možni nestabilnosti vitamina (izdelek je bil 2 leti čez RU) znotraj eksperimentalne napake analizne metode.

Na osnovi rezultatov kvantitativnega vrednotenja vitaminov smo ugotovljali tudi skladnost navajanje vrstnega reda sestavin na seznamu. Neresničen vrstni red navajanja vitaminov smo ugotovili pri enem izdelku – FRE; kot je razvidno iz Preglednice PIII v prilogi, je vsebnost vitamina B5 (0,528 % (m/m)) večja kot B3 (0,045 % (m/m)) – naveden vrstni red pa je najprej

30

vitamin B3 nato B5. Ampak zakonodaja dovoljuje poljuben vrstni red navajanja pri sestavinah s koncentracijo < 1 %, zato je to navajanje zakonsko gledano ustrezno.

4.4 STABILNOSTNA ŠTUDIJA

Ugotovljene vsebnosti vitamina B5 so ustrezale navedbam na ovojnini pri vseh testiranih izdelkih, ki kvantitativno navajajo njegovo vsebnost, medtem ko smo za vitamin B3 odkrili odstopanja (navzgor in navzdol). Z namenom razjasnitve teh rezultatov in problematike stabilnosti B vitaminov smo izbrane izdelke izpostavili pogojem za testiranje stabilnosti. Pri tem smo z namenom pospešitve reakcij nestabilnosti in pridobitve informacij o (ne)stabilnosti vitaminov v KI izvedli pospešeno testiranje. Študijo smo izvajali tudi za krajši čas pri sobni temperaturi, da bi ugotovili stabilnost pri dejanskih pogojih shranjevanja in ovrednotili vpliv temperature na stabilnost vitaminov v izdelkih.

4.4.1 Stabilnost pri povišani temperaturi

Pospešeno testiranje smo izvajali z namenom preverjanja stabilnosti vitaminov B-kompleksa v izdelkih pri pogojih, ki odstopajo od predvidenih pogojev shranjevanja. S povišano temperaturo (KI so ji lahko izpostavljeni med skladiščenjem, transportom, shranjevanjem in uporabo), pospešimo razgradnjo B vitaminov in ugotavljamo odpornost na bolj ekstremne pogoje, hkrati pa v krajšem časovnem intervalu pridemo do podatkov o stabilnosti izdelka.

S pomočjo ekstrapolacije rezultatov iz povišane T pa predvidimo rok uporabe pri predvidenih pogojih shranjevanja. Med izvedbo stabilnostne študije smo izdelke shranjevali v klimatski komori (40 ℃) štiri tedne. V časovnih točkah 0, 1, 2, 3 in 4 tedne smo vzorce pripravili po postopku 3.5.2 oz. 3.5.3 in jih analizirali s HPLC metodo 1 ali 2. Rezultati analiz so prikazani na Slikah 10-14 in so predstavljeni kot razmerje vsebnosti analita po določenem času glede na vsebnost analita ob začetku študije (100 %).

Slika 10: Stabilnost vitamina B3 v tekočih KI pri 40 ℃.

31

Slika 11: Stabilnost vitamina B5 v tekočih KI pri 40 ℃.

Kot je razvidno iz Slik 10 in 11, sta vitamina B3 in B5 v tekočih izdelkih dokaj stabilna.

Vsebnost vitamina B3 je v 5 od 6 testiranih KI ob koncu pospešenega testiranja večja od 95

% začetne vsebnosti, kar je tudi pričakovano na podlagi literaturnih podatkov o njegovi stabilnosti v raztopinah in pri povišani T. Večji upad vsebnosti smo ugotovili pri enem KI – PCN (87,6 % po 4 tednih pri 40 ℃), kar je morebitni razlog, da je proizvajalec dodal prebitno količino tega vitamina, saj je bila ugotovljena vsebnost ob prvem odprtju KI 112,2 % glede na navedeno (Slika 9).

Pri vrednotenju stabilnosti vitamina B5 v 7 KI pri povišani T smo ugotovili bolj obsežno razgradnjo v primerjavi z vitaminom B3. Vsebnost vitamina B5 v petih tekočih KI (od sedmih testiranih) po 4 tednih pade na okoli 90 % začetne (REXR = 89,9 %, AFRT = 90,9 %, THEO

= 88,7 %, PCN = 87,7 %, G&G = 90,6 %) (Slika 11). To se sklada z našimi predvidevanji tudi za KI, saj literaturni podatki kažejo na slabšo stabilnost vitamina B5 pri povišani temperaturi (Preglednica I).

Vitamin B3 je bil enako kot v tekočih izdelkih tudi v 5 testiranih poltrdnih KI dokaj stabilen, saj je bila njegova vsebnost v zadnji časovni točki (štirje tedni na povišani temperaturi) v vseh izdelkih okoli 100 % (100 ± 5 %) (Slika 12).

32

Slika 12: Stabilnost vitamina B3 v poltrdnih KI pri 40 ℃.

Slabšo stabilnost vitamina B5 smo potrdili tudi v 8 testiranih poltrdnih izdelkih, kjer smo znatno razgradnjo (več kot 10 %) ob koncu študije ugotovili pri 2 KI (BALQ10 = 89,4 %, CIEQ10 = 89,0 %) (Slika 13).

Slika 13: Stabilnost vitamina B5 v poltrdnih KI pri 40 ℃.

Na Sliki 14 smo prikazali spremembe vsebnosti vitaminov B3, B5 in B12 v KI MISS po enem mesecu shranjevanja pri 40 ℃.

Slika 14: Stabilnost vitaminov v MISS pri 40 ℃. V okvirčku je prikazan graf primerjave vsebnosti vitamina B12 v MISS v točki 0 in po 4 tednih pri 20 ℃ in 40 ℃.

33

Vitamin B12 je bil prisoten v enem testiranem KI. Pri vrednotenju njegove stabilnosti ob prisotnosti ostalih dveh vitaminov v tem KI (B3 in B5) smo ugotovili, da je vitamin B12 manj stabilen od vitaminov B3 in B5. Kot je razvidno iz grafa v okvirčku pa na stabilnost vitamina B12 v izdelku T ni imela vpliva, saj je pri obeh testiranih temperaturah približno enako upadla vsebnost (20 ℃ = 12,7 % (m/m), 40 ℃ = 10,9 % (m/m)).

Iz rezultatov pospešene študije stabilnosti B vitaminov, in sicer vitamina B3 v 11, vitamina B5 v 15 in vitamina B12 v 1 KI lahko zaključimo, da proučevani vitamini večinoma izkazujejo dobro stabilnost v testiranih izdelkih, saj smo ugotovili največ 12 % razgradnjo po 1 mesecu shranjevanja pri povišani T (40 ℃). Večji obseg razgradnje pri teh pogojih smo opazili le pri vitaminu B6 (25 % razgradnja po 1 mesecu na 40 ℃) (Slika 15).

4.4.2 Vpliv temperature na stabilnost vitaminov B-kompleksa v izbranih KI

Izdelke smo izpostavili tudi pogojem za dolgoročno testiranje stabilnosti, s katerimi se najbolj približamo njihovi stabilnosti pri predvidenih pogojih shranjevanja. Izdelke smo odprli in jih v originalni ovojnini shranili pri sobni T in občasno odpirali, da smo simulirali njihovo dejansko uporabo. Analizirali smo jih vsak teden, do 4 tednov po prvi analizi. V vsaki časovni točki smo vzorce pripravili po postopkih 3.5.2 in 3.5.3. Vpliv temperature na stabilnost vitaminov smo prikazali na Slikah 15-17. Rezultati so podani kot vsebnosti analita po določenem času glede na vsebnost v začetni časovni točki (100 %).

Slika 15: Stabilnost vitamina B6 v KI RB6 pri 40 ℃ in 20 ℃.

Iz Slike 15 je razvidno, da je vitamin B6 pri sobni T stabilen, njegovo razgradnjo pa povišana temperatura močno pospeši, saj je po 4 tednih pri 40 ℃ prisotno le še 74,6 % začetne vsebnosti. Naše ugotovitve potrjuje tudi literatura, saj podatke o njegovi nestabilnosti pri povišani temperaturi lahko prenesemo tudi na KI (Preglednica I).

Na Slikah 16 in 17 predstavljamo še primerjavo vsebnosti vitaminov B3 in B5 v začetni in končni časovni točki študije pri 20 ℃ in 40 ℃.

34

Slika 16: Primerjava vsebnosti vitamina B3 v KI na začetku in po 4 tednih stabilnostne študije pri 20 ℃ in 40 ℃. Cena izdelkov narašča od leve proti desni.

Slika 17: Primerjava vsebnosti vitamina B5 v KI na začetku in po 4 tednih stabilnostne študije pri 20 ℃ in 40 ℃. Cena izdelkov narašča od leve proti desni.

Iz Slik 14-17 lahko zaključimo, da je med proučevanimi vitamini najbolj stabilen vitamin B3. Na splošno pri večini KI (sploh pri vitaminih B5 in B6) opazimo vpliv temperature na stabilnost posameznih vitaminov, saj se je njihova vsebnost zmanjševala po pričakovanem vrstnem redu: začetek > 4 tedni pri 20 ℃ > 4 tedni pri 40 ℃.

Stabilnost vitamina B3 je najslabša v KI PCN (čeprav je izdelek najdražji), medtem ko temperatura nima vpliva na stabilnost. Pri izdelkih REXN, BALV, LRPLi, PCAA, FRE in DUCR pa opazimo pričakovano večjo razgradnjo (tudi do > 5 %) vitamina B3 pri 40 ℃ kot pri 20 ℃.

Stabilnost B5 je najslabša v KI REXR, AFRT, THEO, PCN, G&G, BALQ10, AFYP in CIEQ10. Pri izdelkih THEO, PCN, G&G, BALQ10, CIEQ10, BEP1 je očiten vpliv povišane

35

temperature na stabilnost vitamina B5. Zanimivo je, da v istem izdelku (PCN), temperatura nima vpliva na stabilnost vitamina B3, medtem ko ga ima na B5. To potrjuje ugotovitev (Preglednica I), da na stabilnost vitamina B5 tudi v KI vpliva povišana temperatura, na vitamin B3 pa ne.

V okviru stabilnostne študije smo proučevali tudi povezavo med ceno KI in stabilnostjo vitaminov v KI. Pri tem smo opazili, da dražji izdelki ne zagotavljajo (nujno) boljše stabilnosti vgrajenih vitaminov. Na Sliki 16 opazimo trend večje razgradnje vitamina B3 z naraščajočo ceno. KI PCN je najdražji, a ima na koncu stabilnostne študije največji upad vsebnosti vitamina. Na drugi strani pa imamo KI BALV, ki je najcenejši, oba vitamina v njem pa sta stabilna (tudi pri povišani T).

V nekaterih KI smo opazili tudi večjo vsebnost vitaminov po 4 tednih pri 40 ℃ kot pri 20 ℃ (REV, MABX, MISS, REXR, AFYP). Ta rezultat ni v skladu z našimi pričakovanji in je verjetno posledica nehomogenosti KI in deloma eksperimentalne napake.

V diplomsko nalogo smo vključili tudi izdelke s pretečenim RU (EUC, BEP, BEPD, EUB).

Kot lahko razberemo iz Preglednice PIII v prilogi, so imeli vsi ti izdelki v primerjavi z ostalimi, ki so bili znotraj RU, veliko vsebnost vitamina B5; BEP in EUC celo okoli 5 % (m/m). Najmanjšo vsebnost je vseboval izdelek EUB (0,995 % (m/m)), a je ta koncentracija še vedno dovolj velika za njegovo delovanje.

V primerjavo smo vključili tudi dva enaka izdelka z različnim RU – BEP1 (znotraj RU) in BEP (2 leti po RU). Ugotovili smo, da je vsebnost vitamina B5 v BEP od deklarirane manjša za 4,7 % (priloga, Preglednica PIII), kar kaže na minalni obseg nestabilnosti vitamina oz. je znotraj eksperimentalne napake analizne metode. BEP uvrščamo med zdravila (in ne KI) za katera je zakonodaja veliko bolj stroga kot za KI in proizvajalec mora zagotoviti ustrezno stabilno formulacijo, kar je tudi možen razlog, da je B5 v tem izdelku stabilen vsaj 5 let (3 leta RU + 2 leti po RU).

Če povzamemo, s stabilnostno študijo smo ugotovili, da je od analiziranih vitaminov (B3, B5, B6 in B12) najbolj stabilen vitamin B3. Povišana T v splošnem vpliva na stabilnost vitaminov v KI, a je ta vpliv potrebno preučiti na ravni posameznih vitaminov v KI. Iz tega lahko sklenemo, da le pospešeni testi, ki se pri testiranju kozmetike uporabljajo zaradi njihove hitrosti, pogosto niso uporabni za napovedovanje stabilnosti in RU KI (27). Opazili smo tudi, da je stabilnost vitamina B3 nekoliko slabša v tekočih formulacijah, medtem ko je stabilnost B5 primerljiva v tekočih in poltrdnih izdelkih. Visoka cena izdelka pa ne odraža boljše stabilnosti vgrajenih vitaminov.

36

5. SKLEP

Glavni cilj diplomske naloge je bil vrednotenje vsebnosti B vitaminov v izbranih kozmetičnih izdelkih. Glede na pojavnost v komercialnih KI na slovenskem trgu smo se osredotočili na vitamine B3, B5, B6, B7 in B12. Za vrednotenje vitamina B12 in preverjanje prisotnosti vitamina B7 smo uporabili predhodno razvito HPLC analizno metodo, za ostale vitamine pa smo razvili in vpeljali novo, enostavno in hitro, HPLC metodo.

o Z ustreznim vrednotenjem analiznih metod smo potrdili njihovo selektivnost, linearnost, točnost, ponovljivost in stabilnost analitov ter določili meje zaznave in meje določitve.

Vrednotili smo reprezentativen vzorec 37 izdelkov, različnih proizvajalcev, s cenami od 0,5

Vrednotili smo reprezentativen vzorec 37 izdelkov, različnih proizvajalcev, s cenami od 0,5

In document UNIVERZA V LJUBLJANI FAKULTETA ZA FARMACIJO ANJA ŠENK DIPLOMSKA NALOGA UNIVERZITETNI ŠTUDIJSKI PROGRAM KOZMETOLOGIJA Ljubljana, 2021 (Strani 32-0)