Prehranjevalni testi z GS linijami, ki izražajo Mcp4a

4.3.1.1 Prehranjevalni testi z GS linijami, ki izražajo Mcp4a

V prehranjevalne teste novembra 2010 in maja 2011 smo vključili liniji M_A2 in M_E2, ki sta na RNA in proteinskem nivoju pokazali, da imata največje izražanje proteina Mcp4a.

Ličinke, hranjene z obema transgenima rastlinama, so imele v obeh prehranjevalnih testih

nižjo maso od ličink, gojenih na kontrolnem krompirju (sliki 21 in 23). Razlika je bila statistično značilna od 5. dneva naprej, v novembrskem poskusu pri ličinkah, hranjenih z obema transgenima linijama, v majskem le pri hranjenju ličink z linijo M_E2. Razlika med kontrolno skupino in skupino, hranjeno z linijo M_A2, sicer ni bila statistično značilna, vendar je bila masa ličink, hranjenih z linijo M_A2, ves čas poskusa nižja od ličink, hranjenih z netransgenim krompirjem (slika 23). Poleg razlike v teži smo v poskusu novembra 2010 opazili tudi upočasnjen razvoj ličink, hranjenih s transgenim krompirjem, saj iz 8. na 9. dan še pridobivajo maso, medtem ko ličinke iz kontrolne skupine najvišjo maso dosežejo že 8. dan. Tega pojava pri prehranjevalnih testih maja 2011 nismo mogli opaziti, saj smo teste zaključili 8 dni po izleganju, ko je kontrolna skupina ličink dosegla 4. razvojno fazo in s tem dosegla najvišjo maso. Takrat smo iz ličink izolirali prebavilo za analizo izražanja prebavnih proteaz. Pri deležu preživetja ličink (sliki 22 in 24) v nobenem izmed prehranjevalnih testov ni bilo razlik.

Slika 21: Masa ličink koloradskega hrošča v prehranjevalnem poskusu novembra 2010 z GS linijama M_A2 in M_E2, ki izražata Mcp4a.

Testne ličinke so bile hranjene s transgenima linijama M_A2 in M_E2, kontrolne pa z netransgenim krompirjem (nt). Masa ličink je bila spremljana od 3. - 9. dneva po izleganju. Z oklepajem je označena standardna napaka, z zvezdico pa statistično značilna razlika med ličinkami hranjenimi s transgeno linijo in

netransgenim krompirjem, izračunana s Studentovim t-testom (*p˃0,05, **p˃0,01, ***p˃0,001). 3. dan smo ličinke tehtali skupaj, zato standardna napaka ni podana.

Figure 21: Colorado potato beetle larval growth in feeding bioassay with transgenic potato lines M_A2 and M_E2 in November 2010.

Larvae were fed with Mcp4a expressing transgenic potato lines M_A2 and M_E2 or with nontransgenic control (nt). Larval weight was measured from 3^rd until 9^th day after hatching. Error bars indicate standard errors; asterisks indicate statistically significant differences between control and test groups determined by Student’s t test (***, p < 0.001; **, p < 0.01; *, p < 0.05). On 3^rd day all larvae in tested group were weighted together and consequently standard error could not be applied.

Slika 22: Delež preživetja ličink koloradskega hrošča v prehranjevalnem poskusu novembra 2010 z GS linijama M_A2 in M_E2, ki izražata Mcp4a.

Testne ličinke so bile hranjene z GS linijama M_A2 in M_E2, kontrolne pa z netransgenim krompirjem (nt).

Figure 22: Colorado potato beetle larval survival rate in feeding bioassay with transgenic potato lines M_A2 and M_E2 in November 2010.

Larvae were fed with Mcp4a expressing transgenic potato lines M_A2 and M_E2 or with nontransgenic control (nt).

Slika 23: Masa ličink koloradskega hrošča v prehranjevalnem poskusu maja 2011 z GS linijama M_A2 in M_E2, ki izražata Mcp4a.

Testne ličinke so bile hranjene s transgenima linijama M_A2 in M_E2, kontrolne pa z netransgenim krompirjem (nt). Masa ličink je bila spremljana od 3. - 8. dneva po izleganju. Z oklepajem je označena standardna napaka, z zvezdico pa statistično značilna razlika med ličinkami hranjenimi s transgeno linijo in netransgenim krompirjem, izračunana s Studentovim t-testom (*p˃0,05, **p˃0,01).

Figure 23: Colorado potato beetle larval growth in feeding bioassay with transgenic potato lines M_A2 and M_E2 in May 2011.

Larvae were fed with Mcp4a expressing transgenic potato lines M_A2 and M_E2 or with nontransgenic control (nt). Larval weight was measured from 3^rd until 8^th day after hatching. Error bars indicate standard errors; asterisks indicate statistically significant differences between control and test groups determined by Student’s t test (**, p < 0.01; *, p < 0.05). On 3^rd day all larvae in tested group were weighted together and consequently standard error could not be applied.

Slika 24: Delež preživetja ličink koloradskega hrošča v prehranjevalnem poskusu maja 2011 z GS linijama M_A2 in M_E2, ki izražata Mcp4a.

Testne ličinke so bile hranjene s transgenima linijama M_A2 in M_E2, kontrolne pa z netransgenim krompirjem (nt).

Figure 24: Colorado potato beetle larval survival rate in feeding bioassay with transgenic potato lines M_A2 and M_E2 in May 2011.

Larvae were fed with Mcp4a expressing transgenic potato lines M_A2 and M_E2 or with nontransgenic control (nt).

4.3.1.2 Prehranjevalni testi z GS linijami, ki izražajo Mcp4a z inducirano endogeno obrambo krompirja

V krompirju se po napadu žuželk inducira obrambni odgovor, ki rastlini omogoči zaščito pred škodljivci. Da bi prehranjevalne teste približali tem pogojem, smo septembra 2011 izvedli še dodatne prehranjevalne teste, v katerih smo preverili učinkovitost Mcp4a v kombinaciji z endogenim obrambnim mehanizmom krompirja. Pokazali smo (slika 25), da je bila masa ličink hranjenih s transgeno linijo krompirja M_E2 tudi v tem primeru statistično značilno nižja, medtem ko se masa ličink hranjenih s transgeno linijo krompirja M_A2 ni statistično značilno razlikovala od kontrolne skupine ličink. Ličinke se v deležu preživetja med seboj niso razlikovale (slika 26).

Slika 25: Masa ličink koloradskega hrošča v prehranjevalnem poskusu septembra 2011 z GS linijama M_A2 in M_E2, ki izražata Mcp4a.

Testne ličinke so bile hranjene s transgenima linijama M_A2 in M_E2, kontrolne pa z netransgenim krompirjem (nt). Masa ličink je bila spremljana od 5. - 12. dneva po izleganju . Z oklepajem je označena standardna napaka, z zvezdico pa statistično značilna razlika med ličinkami hranjenimi s transgeno linijo in netransgenim krompirjem, izračunana s Studentovim t-testom (*p˃0,05, **p˃0,01).

Figure 25: Colorado potato beetle larval growth in feeding bioassay with transgenic potato lines M_A2 and M_E2 in September 2011.

Larvae were fed with Mcp4a expressing transgenic potato lines M_A2 and M_E2 or with nontransgenic control (nt). Larval weight was measured from 5^th until 12^th day after hatching. Error bars indicate standard errors; asterisks indicate statistically significant differences between control and test groups determined by Student’s t test (**, p < 0.01; *, p < 0.05).

Slika 26: Delež preživetja ličink koloradskega hrošča v prehranjevalnem poskusu septembra 2011 z GS linijama M_A2 in M_E2, ki izražata Mcp4a.

Testne ličinke so bile hranjene s transgenima linijama M_A2 in M_E2, kontrolne pa z netransgenim krompirjem (nt).

Figure 36: Colorado potato beetle larval survival rate in feeding bioassay with transgenic potato lines M_A2 and M_E2 in September 2011.

Larvae were fed with Mcp4a expressing transgenic potato lines M_A2 and M_E2 or with nontransgenic control (nt).