Slikovni prikaz vpliva NNP na človeške eritrocite

4.2.4.1 1mM NNP

Slika 19. Vpliv 1 mM NNP na izmerjen transverzalni relaksacijski čas protonov znotrajcelične vode (T'2,a)*.

* NNP je povzročil začetno skrajšanje, nato podaljšanje ter počasno vrnitev tega parametra v območje kontrolne velikosti v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1°C. Prikazane so tri neodvisne meritve, označene s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

8,0

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 57

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

Slika 20. Vpliv 1 mM NNPna razmerje med znotraj- in zunajceličnim volumnom vode Vin/Vout v suspenziji eritrocitov*.

* NNP ni povzročil spremembe v razmerju Vin/Vout v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1 °C.

Prikazane so tri neodvisne meritve, označene s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

0,00

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 58

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

4.2.4.2 0.5 mM NNP

Slika 21. Vpliv 0.5 mM NNP na izmerjen transverzalni relaksacijski čas protonov znotrajcelične vode (T'2,a)*.

* NNP je povzročil začetno skrajšanje, nato podaljšanje ter počasno vrnitev tega parametra v območje kontrolne velikosti v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1°C. Prikazane so tri neodvisne meritve, označene s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah

8,0

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 59

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

Slika 22. Vpliv 0.5 mM NNP na razmerje med znotraj- in zunajceličnim volumnom vode Vin/Vout v suspenziji eritrocitov*.

* NNP ni povzročil spremembe v razmerju Vin/Vout v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1 °C.

Prikazane so tri neodvisne meritve, označene s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

0,00

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 60

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

4.2.4.3 0.25 mM NNP

Slika 23. Vpliv 0.25 mM NNP na izmerjen transverzalni relaksacijski čas protonov znotajcelične vode (T'2,a)*.

* NNP je povzročil začetno skrajšanje, nato podaljšanje ter počasno vrnitev tega parametra v območje kontrolne velikosti v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1°C. Prikazane so štiri neodvisne meritve, označene s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

8,0

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 61

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

Slika 24. Vpliv 0.25 mM NNP na razmerje med znotraj- in zunajceličnim volumnom vode Vin/Vout v suspenziji eritrocitov*.

* NNP ni povzročil spremembe v razmerju Vin/Vout v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1°C.

Prikazane so štiri neodvisne meritve, označene s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

0,00

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 62

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

4.2.4.4 0.1 mM NNP

Slika 25. Vpliv 0.1 mM NNP na izmerjen transverzalni relaksacijski čas protonov znotajcelične vode (T'2,a)*.

* NNP je povzročil začetno skrajšanje, nato podaljšanje ter počasno vrnitev tega parametra v območje kontrolne velikosti v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1°C. Prikazane so štiri neodvisne meritve, označene s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

8,0

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 63

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

Slika 26. Vpliv 0.1 mM NNP na razmerje med znotraj- in zunajceličnim volumnom vode Vin/Vout v suspenziji eritrocitov*.

* NNP ni povzročil spremembe v razmerju Vin/Vout v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1°C.

Prikazane so štiri neodvisne meritve, označene s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

0,10 0,13 0,15 0,18 0,20 0,23 0,25 0,28 0,30

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130

Vin/Vout

t [min]

F

G

kontrola F

kontrola G

0,10 0,13 0,15 0,18 0,20 0,23 0,25 0,28 0,30

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130

Vin/Vout

t [min]

E

H

kontrola E

kontrola H

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 64

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

4.2.4.5 0.05 mM NNP

Slika 27. Vpliv 0.05 mM NNP na izmerjen transverzalni relaksacijski čas protonov znotajcelične vode (T'2,a)*.

* NNP je povzročil začetno skrajšanje, nato podaljšanje ter počasno vrnitev tega parametra v območje kontrolne velikosti v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1°C. Prikazani sta dve neodvisni meritvi, označeni s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

Slika 28. Vpliv 0.05 mM NNP na razmerje med znotraj- in zunajceličnim volumnom vode Vin/Vout v suspenziji eritrocitov*.

* NNP ni povzročil spremembe v razmerju Vin/Vout v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1 °C.

Prikazani sta dve neodvisni meritvi, označeni s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

8,0

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 65

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

4.2.4.6 0.025 mM NNP

Slika 29. Vpliv 0.025 mM NNP na izmerjen transverzalni relaksacijski čas protonov znotajcelične vode (T'2,a)*.

* NNP je povzročil začetno skrajšanje, nato podaljšanje ter počasno vrnitev tega parametra v območje kontrolne velikosti v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1°C. Prikazani sta dve neodvisni meritvi, označeni s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

Slika 30. Vpliv 0.025 mM NNPna razmerje med znotraj- in zunajceličnim volumnom vode Vin/Vout v suspenziji eritrocitov*.

* NNP ni povzročil spremembe v razmerju Vin/Vout v vzorcu 20 % hematokrita pri temperaturi 21 ± 1 °C.

Prikazani sta dve neodvisni meritvi, označeni s črko, ki označuje dan poskusa, v različnih barvah.

8,0

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 66

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

Preglednica 8: Analiza vpliva NNP na časovno spreminjanje izmerjenega transverzalnega relaksacijskega časa T'2,a protonov znotajcelične vode v vzorcih 20 % hematokrita*.

koncentracija

* T2,amin je najkrajši ugotovljeni transverzalni relaksacijski čas protonov znotrajcelične vode, izračunan na podlagi največjega izmerjenega skrajšanja T'2,a takoj po dodatku NNP (časovni razpon do prve meritve:

0-5 min)*. Δ T2,a min je deleţ velikosti tega skrajšanjega T2,a min glede na kontrolo velikost T2,a = 78 ms (slednja izmerjena neodvisno na diamagnetnem vzorcu s 100 % hematokritom). τexch max je največja izračunana časovna konstanta difuzijske izmenjave znotrajcelične vode na podlagi najdaljšega izmerjenega T'2,a inkubiranega vzorca (izmerjen v časovnem razponu 20-40 minut inkubacije)**. Δ τexch max je deleţ izračunane največje velikosti τexch inkubiranega vzorca glede na kontrolo velikost τexch. Δ Pdmax je največje izračunano zmanjšanje difuzijske vodne permeabilnosti membrane na podlagi najdaljšega izmerjenega T'2,a***. V preglednici so z * so označeni rezultati T2,amin in τexch, ki se statistično pomembno razlikujejo od kontrole, p<0.05 (studentov t-test) (glej razlago pod 4.1).

Kontrolne velikosti parametra T'2,a za merjene vzorce E-J 𝑥 ± 𝑆𝐸 so: E: 11.8 ± 0.1 ms, časovne konstante difuzijske izmenjave znotrajcelične vode skozi membrano (τexch) in sprememba transverzalnega relaksacijskega časa protonov znotrajcelične vode (T2,a).

Sobotič B. Vpliv NO in HgCl2 na transport vode in obliko humanega eritrocita. 67

Dipl. delo. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Odd. za biologijo, 2007

* Izračun T2,a min je narejen na predpostavki, da je začetno največje izmerjeno skrajšanje T'2,a zgolj posledica skrajšanja T2,a znotrajcelične vode eritrocitov zaradi paramagnetnega efekta NO, ob nespremenjenem τexch (τexch inkubiranega vzorca = τexch kontrole).

** Izračun τexch max je narejen na predpostavki, da je največje izmerjeno podaljšanje T'2,a

zgolj posledica podaljšanja τexch, pri T2,a inkubiranega vzorca = T2,a kontrole (78 ms).

*** Izračun Δ Pd max je narejen na podlagi enačb (27)-(28); pri tem je τexch* = τexch max, Pd * = Pdmax ter τexch in Pd = kontrolni velikosti τexch in Pd ustreznega vzorca.

Če efekta skrajšanja T2,a in podaljšanja τexch sovpadata, so izračunane velikosti T2,a min, ΔT2,a min, τexch max, Δτexch max in ΔPd max podcenjene. Tako je realno skrajšanje T2,a in podaljšanje τexch dosti večje, njun skupni efekt pa se medsebojno zamaskira.

4.2.5 Paramagnetne lastnosti NNP reakcijskih produktov

In document VPLIV NO IN HgCl2 (Strani 73-84)