Spektrofotometer z enim žarkom

Slika 8: Spektrofotometer z dvema žarkoma

Monokromator

Spektrofotometrične meritve potekajo pri izbrani valovni dolžini, ki ustreza absorpcijskemu maksimumu analita, to je valovna dolžina, pri kateri je sprememba absorbance na enoto koncentracije največja. Absorpcijski maksimum določimo tako, da posnamemo spekter analita v širšem spektralnem območju. Iz tega lahko nato določimo, pri kateri valovni dolžini smo dobili največji odziv. Nato sledi merjenje absorbance vzorcev pri določenem absorpcijskem maksimumu [13].

4 Eksperimentalni del

4.1 Uporabljene kemikalije

4.1.1 Standardi vitaminov

• L-askorbinska kislina: Gram-mol, Hrvaška; čistost: >99,0 %

• Riboflavin: Sigma Aldrich, Nemčija; čistost: >98,0 %

• Piridoksin hidroklorid: Sigma Aldrich, Nemčija; čistost: >98 % 4.1.2 Topila in drugi reagenti

• Kloranil: Fluka, Nemčija; čistost: >99 %

• Natrijev hidrogenkarbonat: Merck, Nemčija; čistost: >99,7 %

• Citronska kislina monohidrat: Sigma Aldrich, Nemčija; čistost: >99,5 %

• Acetonitril: Fisher Scientific, UK; čistost: >99,9 %

• Mravljična kislina: Fluka, Nemčija; čistost: >98 %

• že pripravljena raztopina NaOH, 2 M

• že pripravljena raztopina H2SO4, 1 M

• že pripravljena raztopina KMnO4, 0,02 M

4.2 Laboratorijski pripomočki

• UV-VIS spektrofotometer Cary 50, Varian, Nizozemska

• Kiveta kvadratne oblike (1 cm) in kiveta z ožjim vratom (1 cm), material: steklo

• Bučke, avtomatske pipete, čaše, palčke, ladjice za tehtanje, žličke, terilnica, lij, kapalke, filter papir (črn in bel), pH lističi, kavtarice

4.3 Priprava standardnih raztopin in drugih reagentov

4.3.1 Vitamin C

Standardno raztopino vitamina C sem pripravila iz trdnega standarda L-askorbinske kisline. Za pripravo standardne raztopine s koncentracijo 100 mg/L sem natehtala 0,025 g standarda in ga v 250 mL merilni bučki raztopila do oznake z deionizirano vodo.

Potrebovala sem tudi raztopino KMnO4 s koncentracijo 100 mg/L. Prvo raztopino sem pripravila tako, da sem v 250 mL merilno bučko dala 7,2 mL 0,02 M KMnO4, 24,2 mL 1 M H2SO4 in do oznake dopolnila z vodo. Drugo raztopino KMnO4 sem pripravila tako, da sem v 250 mL merilno bučko dala 7,2 mL 0,02 M KMnO4 in do oznake dopolnila z 1 M H2SO4.

4.3.2 Vitamin B2

Standardno raztopino vitamina B2 sem pripravila iz trdnega standarda riboflavina. Za pripravo standardne raztopine z koncentracijo 100 mg/L sem natehtala 0,025 g standarda in ga v 250 mL merilni bučki raztopila do oznake z deionizirano vodo.

Potrebovala sem še citratni pufer s koncentracijo 0,025 M in pH=5, ki sem ga pripravila tako, da sem natehtala 2,63 g citronske kisline, jo v 0,5 L čaši raztopila z 450 mL deionizirane vode, nato pa sem na pH-metru s pomočjo NaOH pH nastavila na 5.

Raztopino sem nato dala v 0,5 L bučko in razredčila do oznake z deionizirano vodo.

4.3.3 Vitamin B6

Standardno raztopino vitamina B6 sem pripravila iz trdnega standarda piridoksin hidroklorida. Za pripravo standardne raztopine s koncentracijo 200 mg/L sem natehtala 0,02 g standarda in ga raztopila v 100 mL bučki z deionizirano vodo in acetonitrilom (1:1).

Potrebovala sem še raztopino natrijevega hidrogenkarbonata s koncentracijo 2 mol/L.

Pripravila sem jo tako, da sem v 100 mL bučko dala 16,8 g natrijevega hidrogenkarbonata in dopolnila do oznake z deionizirano vodo. Bučko sem dala za 15 min na ultrazvočno kopel, vendar se še vseeno ni raztopil ves natrijev hidrogenkarbonat, torej sem imela v bučki nasičeno raztopino.

Potrebovala sem tudi 0,02% raztopino kloranila, ki sem jo pripravila tako, da sem natehtala 0,02 g kloranila in ga v 100 mL bučki do oznake raztopila z acetonitrilom.

4.4 Priprava standardnih raztopin za umeritveno premico

4.4.1 Vitamin C

Iz osnovne standardne raztopine vitamina C s koncentracijo 100 mg/L sem pripravila standardne raztopine z naslednjimi koncentracijami: 5, 10, 20, 30, 50, 70 in 100 mg/L. Za razredčevanje vzorcev sem uporabila raztopino KMnO4 s koncentracijo 100 mg/L.

4.4.2 Vitamin B2

Iz osnovne standardne raztopine vitamina B2 s koncentracijo 100 mg/L sem pripravila standardne raztopine z naslednjimi koncentracijami: 5, 10, 20, 30 in 40 mg/L. Za razredčevanje vzorcev sem uporabila citratni pufer s koncentracijo 0,025 mol/L in pH 5.

Pri ponovni pripravi umeritvene premice pa sem pripravila standardne raztopine z naslednjimi koncentracijami: 5, 10, 15, 20 in 30 mg/L. Za razredčevanje vzorcev sem uporabila citratni pufer s koncentracijo 0,025 mol/L in pH 5.

4.4.3 Vitamin B6

Iz osnovne standardne raztopine vitamina B6 s koncentracijo 200 mg/L sem pripravila standardne raztopine z naslednjimi koncentracijami: 0,4. 2, 5, 10, 20, 30, 40 in 50 mg/L.

Za razredčevanje vzorcev sem uporabila acetonitril.

4.5 Priprava vzorcev

Vitamin B6 sem določevala v dveh vzorcih in sicer v multivitaminskih tabletah Kruger (Slika 9) in pa v Cedeviti (Slika 10).

Multivitaminsko tableto Kruger sem raztopila v deionizirani vodi in vzorec prefiltritala skozi filtrni papir, nato pa sem ga dala v 50 mL bučko in razredčila do oznake z deionizirano vodo.

Slika 9: Deklaracija multivitaminskih tablet Kruger

Natehtala sem 25 g prahu Cedevite, ki sem ga prav tako raztopila v deionizirani vodi, prefiltritala skozi filtrni papir 'beli trak', nato pa sem vzorec prenesla v 50 mL bučko in razredčila do oznake z deionizirano vodo.

Slika 10: Deklaracija multivitaminskega napitka Cedevita

Vitamin C in B2 sem določala v zgornjih dveh vzorcih in še v dodatnem vzorcu Supradyna (Slika 11), ki sem ga pripravila tako, da sem 2 tableti raztopila v deionizirani vodi, vzorec filtrirala skozi filtrni papir 'beli trak', ga prenesla v 50 mL bučko in dopolnila do oznake z deionizirano vodo.

Slika 11: Deklaracija prehranskega dopolnila Supradyn

V tabeli 1 sem zbrala pričakovane vrednosti posameznega vitamina v vsakem od vzorcev.

Tabela 1: Pričakovane vsebnosti vitaminov v vzorcih glede na podatke na embalaži

4.6 Spektrofotometrična metoda

Za analizne metode sem uporabila spektrofotometrične metode. Absorpcijskih maksimumov za posamezni vitamin ni bilo potrebno določati, saj sem jih predhodno že poiskala v literaturi. Absopcijski maksimum pri metodi za vitamin C je pri 525 nm, pri metodi za vitamin B2 pri 550 nm in pri metodi za vitamin B6 pri 440 nm.

Merjenje absorbanc je potekalo tako, da sem najprej določila slepo vrednost za vsak set meritev, tako da sem pomerila absorbanco standardne raztopine, ki je bila brez analita.

Sledilo je merjenje absorbance standardnih raztopin, ki je potekalo tako, da sem kiveto pred meritvijo najprej sprala z ustrezno raztopino, nato pa sem jo z njo napolnila, dala v spektrofotometer in pomerila absorbanco. Pri vseh setih standardnih raztopin sem absorbance pomerila trikrat. Na enak način sem nato izmerila absorbance vzorcem.

Vitamin C Vitamin B2 Vitamin B6

4.6.1 Metoda za vitamin C

Za določanje vitamina C sem preizkušala spektrofotometrično metodo, ki temelji na zmanjšanju vijoličnega obarvanja raztopine KMnO4 po reakciji z vitaminom C, saj se ta porabi. Vitamin C je namreč močan reducent, zato ga lahko z močnim oksidantom, kot je KMnO4, v kislem oksidiramo. Pri tem poteče naslednja reakcija:

2KMnO4 + 5C6H8O6 + 3H2SO4 → 2MnSO4 + 5C6H6O6 + K2SO4 + 8H2O Absorpcijski maksimum nastale raztopine je pri 525 nm.

Pri tej metodi je potrebno v prvem koraku določiti umeritveno premico. Za to potrebujemo raztopino KMnO4 s koncentracijo 100 mg/L in pa raztopine vzorcev standarda L-askorbinske kisline z različnimi koncentracijami. Tem raztopinam dodamo enak volumen raztopine KMnO4 in takoj po dodatku poteče reakcija redukcije in zmanjšanje vijoličnega obarvanja raztopine. Pri tem dejansko določamo razliko v spremembi absorpcije med slepim vzorcem, ki ne vsebuje vitamina C, in pa vzorcem, ki vitamin C vsebuje.

Po določitvi umeritvene premice v drugem koraku sledi določanje v realnih vzorcih.

Potrebno je pripraviti raztopine vzorcev, ki jim dodamo enak volumen KMnO4, kot v prvem koraku [5].

4.6.2 Metoda za vitamin B2

Za določanje vitamina B2 sem preizkušala spektrofotometrično metodo, ki temelji na merjenju rumenega obarvanja raztopine riboflavina. Njen absorpcijski maksimum je pri 440 nm.

Pri tej metodi je potrebno v prvem koraku določiti umeritveno premico. Za to potrebujemo standardno raztopino riboflavina, ki ji dodamo citratni pufer s koncentracijo 0,025 M in pH 5, da dobimo različne koncentracije standardne raztopine riboflavina.

Po določitvi umeritvene premice v drugem koraku sledi določanje v realnih vzorcih.

Potrebno je pripraviti raztopine vzorcev, ki jih do želene koncentracije redčimo s citratnim pufrom [8].

4.6.3 Metoda za vitamin B6

Za določanje vitamina B6 sem preizkušala spektrofotometrično metodo, ki temelji na tvorbi obarvanega kompleksa med vitaminom in kloranilom. Raztopina piridoksin klorida

je kisla, zato jo moramo v prvem koraku narediti bazično s pomočjo 2 M natrijevega hidrogenkarbonata, da lahko v drugem koraku kot elektron akceptor reagira z kloranilom.

S to reakcijo dosežemo tvorbo vijoličnega kompleksa z absorpcijskim maksimumom pri 550 nm (Slika 12).

Slika 12: Rekacija tvorbe vijoličnega kompleksa B6 s kloranilom

Pri tej metodi je potrebno v prvem koraku določiti umeritveno premico. Za to potrebujemo standardno raztopino piridoksin hidroklorida, raztopino 2 M natrijevega hidrogenkarbonata in acetonitril. V prvi fazi standardni raztopini piridoksin hidroklorida dodamo 1 mL 2 M natrijevega hidrogenkarbonata in dobro premešamo, nato pa dodamo še različne volumne acetonitrila, da dobimo različne koncentracije standardne raztopine piridoskin hidroklorida. Po dodatku acetonitrila lahko takoj opazimo tvorbo vijoličnega produkta.

Po določitvi umeritvene premice v drugem koraku sledi določanje v realnih vzorcih.

Potrebno je pripraviti raztopine vzorcev, ki jim dodamo 1 mL natrijevega hidrogenkarbonata in jih do želene koncentracije nato razredčimo z acetonitrilom [12].

5 Rezultati z razpravo

Cilj pri spektrofotometričnem določanju vitaminov je bil, da v prvi fazi za vse 3 vitamine izberem absorpcijski maksimum, saj s takim pristopom bistveno zmanjšamo napake, izboljšamo občutljivost in mejo zaznavnosti metode. Nato sem za vse 3 vitamine izdelala umeritvene premice, ki naj bi bile linearne.

V drugi fazi pa sem analizne metode poskušala prenesti na realne vzorce in s pomočjo umeritvenih premic poskušala določiti koncentracijo iskanega analita v različnih vzorcih prehranskih dopolnil. Rezultate sem primerjala z deklariranimi vrednostmi.

5.1 Določanje vitamina C

Delo sem začela s pripravo umeritvene premice. Iz standardne raztopine askorbinske kisline s koncentracijo 100 mg/L sem v Coulterjevih posodah pripravila raztopine s koncentracijami: 0, 5, 10, 20, 30, 50, 70 in 100 mg/L v 10 mL. Tem vzorcem sem nato dodala 10 mL raztopine KMnO4 s koncentracijo 100 mg/L in deionizirano vodo, da je bil skupni volumen vsakega vzorca 20 mL. Po približno 30 s sem v vzorcih opazila rjavo obarvanje, zlasti v Coulterjevih posodah z višjim preostankom KMnO4 (Slika 13).

Slika 13: Prvi poskus določanja umeritvene premice za vitamin C

Sklepala sem, da je nastal MnO2 (s), torej reagent KMnO4 v prvem poskusu ni bil dovolj kisel. V takem primeru poteka redukcija MnO4- le do MnO2(s), ne pa do Mn²⁺ (Slika 14).

Slika 14: Reakcije redukcije KMnO4

Pripravila sem novo raztopino KMnO4, tako da sem za razredčevanje uporabila le 1 M raztopino H2SO4. Celoten postopek priprave raztopin za merjenje sem ponovila in tokrat je bilo obarvanje lepo rožnato (Slika 15). Absorbance vseh raztopin sem izmerila 3x.

Slika 15: Drugi poskus določanja umeritvene premice za vitamin C po 10 min

Slika 16: Drugi poskus določanja umeritvene premice za vitamin C po 60 min Iz samih vrednosti absorbanc pa tudi slik raztopin (Slika 15 in 16) je bilo razvidno, da se barva in posledično absorbanca raztopin s časom spreminjajo, zato sem ponovno pripravila raztopine in absorbance merila v 10 min časovnih intervalih. Tudi po 1 h se niso ustalile, zato sem se odločila, da bom absorbance raztopin pomerila v najkrajšem možnem času in tudi za umeritveno krivuljo sem izbrala premico, katere absorbance so bile posnete v največ 10 min po pripravi (Graf 1).

(s)

Graf 1: Umeritvena premica za vitamin C

Sledila je priprava vzorcev. Vzorec Cedevite sem pripravila tako, da sem v Coulterjevo posodo dala 0,5 mL že pripravljenega vzorca (glej poglavje 4.5), dodala 9,5 mL deionizirane vode in 10 mL raztopine KMnO4. Vzorec Kruger multivitaminskih tablet sem pripravila tako, da sem v Coulterjevo posodo dala 0,4 mL že pripravljenega vzorca, dodala 9,6 mL deionizirane vode in 10 mL raztopine KMnO4. Vzorec Supradyna sem pripravila tako, da sem v Coulterjevo posodo dala 0,1 mL že pripravljenega vzorca, dodala 9,9 mL deionizirane vode in 10 mL raztopine KMnO4. Za vsako prehransko dopolnilo sem pripravila po 2 vzorca. V prvem poskusu so se vzorci ob dodatku KMnO4

popolnoma razbarvali, torej se je porabil ves oksidant. Poskus sem ponovila, tako da sem naredila 10x redčitve vseh vzorcev, vendar sta se tudi v tem primeru vzorca Cedevite in Kruger multivitaminskih tablet popolnoma razbarvala (Slika 17), zato sem pomerila le absorbanco Supradyna. Končno izračunana koncentracija vitamina C v Supradynu je bila 77 mg/L (deklaracija 64 mg/L), vzrok za odstopanje izračunane koncentracije od deklarirane je prisotnosti drugih primesi, ki jih je oksidant oksidiral in se pri tem porabil.

Iz rezultatov pa lahko sklepam, da je teh primesi veliko več v vzorcu Cedevite in Kruger kot pa v Supradynu.

Slika 17: Prvi poskus določanja vitamina C v vzorcih (K= Kruger, C= Cedevita, S=

Supradyn) 5.2 Določanje vitamina B2

Delo sem začela s pripravo umeritvene premice. Iz standardne raztopine riboflavina s koncentracijo 100 mg/L sem v 10 mL merilnih bučkah pripravila raztopine s koncentracijami: 0, 5, 10, 20, 30 in 40 mg/L in do oznake dopolnila s citratnim pufrom.

Raztopinam sem 3x pomerila absorbance (Slika 18).

Slika 18: Prvi poskus določanja umeritvene premice za vitamin B2

Graf 2: Umeritvena premica za vitamin B2, širše območje

Ker je zadnja vrednost nekoliko krivila umeritveno premico (Graf 2) navzdol, sem sklepala, da je zadnja koncentracija že previsoka, zato sem ponovno pripravila raztopine s koncentracijami: 0, 5, 10, 15, 20 in 30 mg/L. Ponovno sem vsem raztopinam 3x pomerila absorbance (Slika 19) in v tem primeru zadnja vrednost ni več tako zelo krivila umeritvene premice navzdol (Graf 3).

Slika 19: Drugi poskus določanja umeritvene premice za vitamin B2

y = 0,0178x + 0,0714

Graf 3: Umeritvena premica za vitamin B2, ožje območje

Sledila je priprava vzorcev tako, da sem v v 10 mL merilno bučko dala posamezno po 0,5 mL že pripravljenega vzorca (glej poglavje 4.5) Cedevite, Kruger multivitaminskih tablet in Supradyna ter do oznake dopolnila s citratnim pufrom (Slika 20). Pomerila sem absorbance, ki so bile zelo visoke, zato sem se odločila preizkusiti še metodo standardnega dodatka.

Za vsako prehransko dopolnilo sem pripravila dve bučki, v eno sem dala 0,5 mL vzorca in 0,5 mL standardne raztopine s koncentracijo 100 mg/L ter dopolnila do oznake s citratnim pufrom, v drugo pa sem dala le 0,5 mL vzorca in dopolnila do oznake s citratnim pufrom in pomerila absorbance. Končno izračunana koncentracija vitamina B2 v Cedeviti je bila 296,7 mg/L (deklaracija 0,93 mg/L), v Krugerju 90,4 mg/L (deklaracija 1,4 mg/L) in v Supradynu 44,8 mg/L (deklaracija 4,2 mg/L). Vzrok za odstopanje izračunane koncentracije od deklarirane so dodana barvila, ki motijo merjenje absorbance.

y = 0,0196x + 0,0627

Slika 20: Prvi poskus določanja vsebnosti vitamina B2 v vzorcu 5.3 Določanje vitamina B6

Delo sem pričela s pripravo umeritvene premice. Iz standardne raztopine piridoksina s koncentracijo 200 mg/L sem v 10 mL merilnih bučkah pripravila raztopine s koncentracijami: 0,4, 2, 5, 10, 20, 30, 40 in 50 mg/L, dodala 1 mL raztopine NaHCO3, mešala 1 min, dodala 2,5 mL raztopine kloranila in dopolnila do oznake z deionizirano vodo. Dobila sem raztopine precej podobne barve (Slika 21), česar nisem pričakovala, a sem vseeno pomerila absorbance, ki seveda niso bile ustrezne (slepi vzorec je imel previsoko vrednost, razlike v absorbancah so bile zelo majhne, pa tudi vrednosti niso lepo naraščale s koncentracijo).

Slika 21: Prvi poskus določanja umeritvene premice za vitamin B6

Zato sem v drugem poskusu raztopine pripravila podobno, le da sem jih do oznake razredčila z acetonitrilom. V tem primeru se je v bučkah izločila trdna bela snov, sklepala sem, da je to karbonat, ki je slabo topen v acetonitrilu. Počakala sem, da se bo trdna snov posedla na dno bučk, vendar so bile raztopine nad njo še vedno rahlo motne, kar je motilo meritev absorbanc (Slika 22). Slepa vrednost je bila zopet zelo visoka, zato so bile

absorbance vzorcev glede na slepo negativne. Sklepala sem, da je težava v motnosti raztopin in pa v tem, da NaHCO3 ni zares 2 M, saj se ni povsem raztopil in zato raztopine niso dovolj bazične.

Slika 22: Drugi poskus določanja umeritvene premice za vitamin B6

Odločila sem se, da bom NaHCO3 zaradi te težave zamenjala z NaOH z istim pH.

Pomerila sem pH NaHCO3, ki je bil 8,5 in glede na to preračunala, da moram v raztopine dodati 30 μL 0,001 M NaOH (naredila sem ga iz že pripravljenega 2 M NaOH, tako da sem v 100 mL bučki 0,05 mL 2 M NaOH razredčila do oznake). V posamezno raztopino sem nato najprej dodala 30 μL, nato pa še 50 μL raztopine NaOH, vendar pH raztopine ni bil dovolj bazičen, pa tudi absorbance niso bile ustrezne, zato sem se odločila uporabiti kar 1 mL 2 M NaOH. Pripravila sem 2 paralelki raztopin in dobila 2 umeritveni premici, pri obeh pa so bila odstopanja pri nižjih koncentracijah (Slika 23, Graf 4).

Slika 23: Tretji poskus določanja umeritvene premice za vitamin B6

Graf 4: Umeritvena premica za vitamin B6, širše območje

Zato sem se odločila, da bom prve 3 točke na umeritveni premici izpustila in tako sem dobila linearno umeritveno premico (Graf 5).

y = 0,0037x + 0,0947 R² = 0,774

0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35

0 10 20 30 40 50 60

Absorbanca [/]

Koncentracija [mg/L]

Vitamin B6

Graf 5: Umeritvena premica za vitamin B6, ožje območje

Sledila je priprava vzorcev tako, da sem v 10 mL merilno bučko posamezno dala po 2,5 mL že pripravljenega vzorca (glej poglavje 4.5) Cedevite in Kruger multivitaminskih tablet, 1 mL NaOH in 2,5 mL kloranila in dopolnila do oznake z acetonitrilom. Pri tem pa sta se pojavili 2 težavi:

- nastali sta 2 fazi, saj se zaradi prenasičenja vode s solmi acetonitril v njej ni več dobro raztapljal in se je zato ločil;

- pri Cedeviti se je med tema dvema fazama pojavila še plast bele usedline;

sklepala sem, da je to karbonat iz vzorca.

Težavo s karbonatom sem poskusila rešiti z dodatkom mravljične kisline (predhodno sem koncentrirano kislino razredčila z deionizirano vodo v razmerju 1:10): v raztopine Cedevite 11 kapljic, v raztopine Kruger pa 3 kapljice, dokler pH vzorca ni bil enak 3.

Težavo z ločenimi fazami sem poskusila rešiti z razredčevanjem do oznake z deionizirano vodo namesto z acetonitrilom.

Pri vzorcih zaradi teh sprememb ni prišlo do pričakovanega vijoličnega obarvanja.

Sklepala sem, da zaradi dodatka mravljične kisline vzorec ni bil dovolj bazičen za tvorbo kompleksa. Že pri pripravi umeritvenih premic pa sem lahko ugotovila, da v primeru uporabe vode namesto acetonitrila ne dobimo do pravih rezultatov.

y = 0,0055x + 0,0282

Določitev v vzorcu je bila torej neuspešna zaradi kompleksne matrice analiziranih vitaminskih pripravkov. Ti namreč vsebujejo veliko polnil, ki so v vodi topna in jo nasitijo z različnimi solmi.

6 Zaključek

Vitamini so bistvena hranila, ki jih naše telo potrebuje za svoje delovanje. Ker jih telo samo ne more zgraditi, je pomembno, da jih z uravnoteženo prehrano dnevno zaužijemo dovolj, saj pomanjkljiv vnos lahko povzroči hude motnje presnove, poškodbe organov in številne bolezni. Pri tem si lahko pomagamo tudi z jemanjem vitaminov v obliki vitaminskih napitkov ali dopolnil. Ravno zaradi tega pa je pomembno, da znamo določiti pravilno vsebnost vitaminov v tovrstnih izdelkih, da lahko vnos prilagajamo glede na dnevne potrebe vnosa posameznih vitaminov.

V diplomskem delu sem poskusila spektrofotometrično določiti vitamin C, B2 in B6 v nekaj realnih vzorcih. Pri vseh treh metodah so se že ob določanju umeritvene premice ali pa kasneje ob določanju vitamina v realnem vzorcu pojavile težave.

Pri vitaminu C sem pri določanju umeritvene premice opazila časovno spreminjanje obarvanja raztopin, ki se tudi po 1 h ni ustalilo, pri določanju v vzorcih pa se je takoj ob dodatku porabil ves KMnO4 zaradi prisotnosti drugih primesi, ki jih je oksidant oksidiral in se pri tem porabil.

Pri vitaminu B2 se je pojavila težava pri določanju v vzorcih zaradi dodanih barvil, ki motijo spektrofotometrične meritve.

Pri vitaminu B6 pa določanje v vzorcih ni bilo možno zaradi prenasičenja vzorca s solmi, ki so onemogočile potek reakcije nastanka obarvanega kompleksa.

Ustrezen način določanja bi torej bil z uporabo HPLC tehnike. Druga možnost pa je, da bi iz vzorcev odstranila problematične primesi, kot so polnila in barvila, oziroma bi poskusila iz vzorcev izolirati posamezen vitamin, nato pa bi sledila spektrofotometrična določitev.

7 Viri

[1] “Kaj so vitamini.” https://www.ezdravje.com/zdravje-in-dobro-pocutje/vitamini-in-minerali/vitamini/ (accessed Jul. 03, 2021).

[2] “Vitamin - Regulatory role.”

https://www.britannica.com/science/vitamin/Regulatory-role (accessed Jul. 03, 2021).

[3] “Zakaj je Vitamin C esencialno mikrohranilo?” https://www.zdravo.si/vitamin-c/

(accessed Jul. 03, 2021).

[4] “Varnostni list: vitamin C.” https://www.carlroth.com/medias/SDB-3525-SI-SL.pdf?context=bWFzdGVyfHNlY3VyaXR5RGF0YXNoZWV0c3wyMzU1NT

R. Maldonado, SPECTROPHOTOMETRIC ANALYSIS OF VITAMIN C IN DIFFERENT MATRICES UTILIZING POTASSIUM PERMANGANATE, Eur.

Int. J. Sci. Technol. 2018, 7(1): 70-84.

[6] Z. Gazdik, Ondrej Zitka, Determination of Vitamin C (Ascorbic Acid) Using High Performance Liquid Chromatography Coupled with Electrochemical Detection, Sensors 2008, 8(11): 7097–7112. doi: 10.3390/s8117097

[7] “Vitamin B2 | Riboflavin | Esencialno hranilo je pomembno za rast in plodnost.”

https://www.zdravo.si/vitamin-b2-riboflavin/ (accessed Jul. 03, 2021).

[8] R. Bartzatt, M. L. Follis, Detection and Assay of Riboflavin (Vitamin B2) Utilizing UV/VIS Spectrophotometer and Citric Acid Buffer, J. Sci. Res. Reports 2014, 3(6):

799–809. doi: 10.9734/jsrr/2014/8598

[9] R. Bartzatt, T. Wol, Detection and Assay of Vitamin B-2 (Riboflavin) in Alkaline Borate Buffer with UV/Visible Spectrophotometry, Int. Schol. Res. Not. 2014, Article ID 453085, 7 str. doi: 10.1155/2014/453085

[10] “Vitamin B6 | Piridoksin | Zakaj je pomembno to esencialno hranilo?”

https://www.zdravo.si/vitamin-b6-piridoksin/ (accessed Jul. 03, 2021).

[11] “Varnostni list: piridoksin hidroklorid.” https://www.carlroth.com/medias/SDB-

T914-SI-SL.pdf?context=bWFzdGVyfHNlY3VyaXR5RGF0YXNoZWV0c3wzMjk1NzZ 8YXBwbGljYXRpb24vcGRmfHNlY3VyaXR5RGF0YXNoZWV0cy9oMzcvaG RjLzg5NzE0Njk2ODQ3NjYucGRmfGJiOGI4NDRhMTZkMGQ2NjUyNWE3Y zMxMmEzMGMwZGE0ZmU3MGRmM2EwYTFmMGZjNjAwOTI3 (accessed

Jul. 03, 2021).

[12] A. Raza, A. Rehman, S. B. Niazi, T. M. Ansari, Spectrophotometric Determination of Pyridoxine Hydrochloride (Vitamin B6) in Bulk and Tablets by Charge-Transfer

In document DIPLOMSKO DELO (Strani 27-0)