Ginekološka klinika

5.3.4. Ginekološka klinika

Zaradi preobremenitve negovalnega kadra zaradi velikega presežka dela (50 % večje število carskih rezov v petih letih) in nenadomeščenih daljših bolniških ter porodniških odsotnosti, zaenkrat naloge še nismo izpeljali. Ob večjem število specializantov in dveh novih sobnih zdravnikih na pooprativnem oddelku bomo pričeli z vključevanjem porodnic po carskem rezu s 01.03.2010.

70220 Placentni protein-13 in zarezni indeks materničnih arterij kot napovedna dejavnika za preeklampsijo: asist.dr.Tanja Premru-Sršen,dr.med.

V študijo smo vključili že vseh 260 nosečnic, ki so tudi že rodile, in opravili vse ultrazvočne meritve.

Serum nosečnic je zmrznjen. V naslednjem letu bomo opravili določitve koncentracije PP-13 v zamrznjenem seruma nosečnic, ki bodo razvile preeklampsijo pred 34. tednom nosečnosti in kontrolne skupine nosečnic brez zapletov v nosečnosti.

Klinični oddelek za reprodukcijo

70135 Anti- Müllerjev hormon v serumu in foliklovi tekočini pri spontanih in stimuliranih postopkih:

prof.dr. Eda Vrtačnik Bokal, dr.med.

V letu 2009 smo nadaljevali z zastavljeno raziskavo in pri ženskah vključenih v program OBMPV merili koncentracije AMH, luteiniziraločega hormona (LH), folikel stimulirajočega hormona (FSH), estradiola (E2) in progesterona (P) v serumu in foliklovi tekočini ter jih primerjali med skupinama žensk v modificiranih naravnih ciklusih (MNC) in spodbujenih ciklusih. Vključili smo 29 žensk, ki so bile v programu zunajtelesne oploditve v MNC, in 30 žensk, ki so imele zunajtelesno oploditev v ciklusih spodbujenih z GnRH antagonistom in gonadotropinom. Vzorce seruma in foliklove tekočine smo pridobili na dan aspiracije jajčnih celic. Koncentracija AMH v foliklovi tekočini je bila približno 2-krat višja v MNC kot v spodbujenih ciklusih, medtem ko je bila serumska koncentracija AMH v obeh skupinah primerljiva. Serumska koncentracija LH je bila skoraj 50-krat višja, koncentracija LH v foliklovi tekočini pa skoraj 8-krat višja v MNC kot v spodbujenih ciklusih. Koncentracija LH je bila skoraj 4-krat nižja v jajčnih foliklih, kjer je prišlo do implantacije zarodka, kot v foliklih, kjer do implantacije ni prišlo. V spodbujenih ciklusih se je serumska koncentracija AMH višala z večanjem števila pridobljenih jajčnih celic in nižala s starostjo ženske. V MNC smo našli negativno povezavo med koncentracijo AMH v foliklovi tekočini in volumnom aspirirane foliklove tekočine ter med serumsko koncentracijo LH in volumnom aspirirane foliklove tekočine. Serumska koncentracija FSH je bila v MNC 2-krat višja kot v spodbujenih ciklusih, folikularna koncentracija FSH pa je bila v obeh skupinah primerljiva. Serumska koncentracija E2 je bila v MNC 8-krat nižja, folikularna koncentracija pa 2-krat višja kot v spodbujenih ciklusih. Tudi serumska koncentracija P je bila v MNC 8-krat nižja kot v spodbujenih ciklusih, folikularna koncentracija P pa v obeh skupinah primerljiva. Ugotovili smo, da se koncentracije hormonov v serumu in foliklovi tekočini močno razlikujejo med MNC in spodbujenimi ciklusi. Močno povišane koncentracije LH v serumu in foliklovi tekočini bi lahko imele vpliv na endometrijsko receptivnost in bi bile zato lahko odgovorne za slabši uspeh zunajtelesne oploditve v MNC. V spodbujenih ciklusih pa višja serumska koncentracija AMH napoveduje večje število pridobljenih jajčnih celic.

Objave:

- Jančar Nina, Virant Klun Irma, Vrtačnik Bokal Eda. Serum and follicular endocrine profile is different in modified natural cycles than in cycles stimulated with gonadotropin and gonadotropin-releasing hormone antagonist. Fertil. steril. [Print ed.] v tisku

70188 Matične celice jajčnika in in vitro oogeneza pri ženskah s prezgodnjo menopavzo: doc.dr. Irma

Pri ženskah s prezgodnjim prenehanjem delovanja jajčnikov oziroma s prezgodnjo menopavzo in pri pomenopavznih ženskah smo:

- iz populacije celic postrganih iz površinskega epitelija jajčnika izolirali še nepoznane majhne, okrogle, rumenkaste celice s premerom od 2 do 4 m in majhno, mehurčku podobno strukturo, ki ne ustrezajo krvnim celicam in celicam imunskega sistema in so zelo podobne embrionalnim matičnim celicam,

- dokazali, da te celice izražajo markerje, značilne za pluripotentne matične celice: površinski antigen SSEA-4 (s pretočno citometrijo) in transkripcijske faktorje Oct-4B, Sox-2, Nanog (z RT-PCR)

- ob prisotnosti heterologne folikularne tekočine iz postopka zunajtelesne oploditve vzgojili te celice v zgodnjim jajčnim celicam podobne celice, ki izražajo gene, značilne za jajčno celico, na primer gene za zono pelucido,

- ugotovili, da ima večina teh celic normalno - 1 jedro (barvanje z DAPI),

- ugotovili, da jajčnim podobne celice, vzgojene v pogojih in vitro nimajo večje pojavnosti anevploidij; dokazali smo tudi majhen delež haploidnih jeder (z metodo fluorescenčne in situ hibridizacije),

- ugotovili, da se delež teh celic spontano deli v zarodkom oziroma blastocistam podobne strukture, odkrili SSEA-4 pozitivne celice tudi po barvanju histoloških rezin jajčnika pri ženskah s prezgodnjo menopavzo in pomenopavznih ženskah.

Vzpostavili smo raziskovalno sodelovanje z Inštitutom za anatomijo in Centrom za regenerativno biologijo in medicino Univerze Tuebingen, Nemčija.

Objave:

- Virant-Klun I, Rozman P, Cvjeticanin B, Vrtacnik-Bokal E, Novakovic S, Rülicke T, Dovc P, Meden-Vrtovec H. Parthenogenetic embryo-like structures in the human ovarian surface epithelium cell culture in postmenopausal women with no naturally present follicles and oocytes.

Stem Cells Dev. 2009 Feb;18(1):137-50. [COBISS.SI-ID 714875]

- Virant-Klun I in Skutella T. Stem cells in aged mammalian ovaries. Aging Journal, Februar 2010 – v tisku.

- Virant-Klun I, Vogler A, Šinkovec J, Hren M, Gruden K, Maličev E, Meden-Vrtovec H. V: 4.

Kongres ginekologov in porodničarjev Slovenije z mednarodno udeležbo, Portorož, 11. do 13.

november 2009, (Zdravniški Vestnik, Letn. 78, Suppl 1). Ljubljana: Slovensko zdravniško društvo, 2009, str. I-57 - I-61. [COBISS.SI-ID 26260185]

70190 Uporaba hialuronske kisline (SpermSlow) za selekcijo spermijev za postopek neposrednega vnosa spermija v citoplazmo jajčne celice (ICSI): Liljana Bačer Kermavner, univ.dipl.biol.

V letu 2009 je raziskovalna naloga s številko 70190 potekala od januarja do decembra. Od začetka študije do sedaj smo vključili 41 parov. Vsi postopki so bili del klinične obravnave v postopku OBMP in so bili financirani iz rednih sredstev Ginekološke klinike, zato dokumenti pacientk niso bili označeni s številko raziskovalne naloge pri odpustu.

Vzorci za določanje protaminov z metodo RT-PCR so shranjeni v tekočem dušiku. V laboratoriju Centra za funkcijsko genomiko in bio-čipe na Inštitutu za Biokemijo, Medicinske fakultete Ljubljana smo poskušali optimizirati metodo izolacije RNA iz semenčic. Iz štirih vzorcev izolirana RNA ni bila ustrezne čistosti za RT-PCR, zato smo se odločili, da opravimo funkcionalne teste na vzorcih brez selekcije in po selekciji s hialuronanom. Vzorci za določanje fragmentacije DNA in mitohondrijski potencial ne smejo biti zamrznjeni, zato smo zbrali 30 vzorcev 15 pacientov in jih poslali v Laboratorij za pretočno citometrijo na Inštitutu za mikrobiologijo in imunologijo, Medicinske fakultete Ljubljana, kjer so vzorce analizirali. Vrednosti fragmentacije DNA kažejo povezavo z nekaterimi parametri klasičnega spermiograma in razvojem zarodkov. Skupina je premajhna za statistično obdelavo zato bomo z vzorčenjem nadaljevali.

70217 Laparoskopsko operiranje globoke infiltrativne endometrioze: doc.dr. Martina Ribič-Pucelj, dr.med.

V letu 2009 je bilo sprejetih na Ginekološko kliniko 32 bolnic z rektovaginalno endometriozo in sumom na prizadetost črevesja. Pri vseh je bil narejen endorektalni ultrazvok, katerega občutljivost je bila 60 oz.

70%, specifičnost pa 90 oz. 100% (preiskave sta izvajala 2 centra). Pri 19 bolnicah je bila potrjena prizadetost črevesa in narejena laparoskopska operacija endometrioze z resekcijo črevesa (15 resekcij rektosigme, 2 resekciji terminalnega ileuma in 2 operaciji slepiča s caekumom), pri ostalih pa samo sprostitev črevesja in ostali posegi rektovaginalne endometrioze.

70216 Prenos zarodka 3. ali 5. dan pri bolnicah s slabim odzivom na stimulacijo ovulacije: doc.dr.

Andrej Vogler, dr.med.

Pri bolnicah, ki se slabo odzovejo na stimulacijo ovulacije z gonadotropini dobimo podpovprečno število jajčnih celic in posledično podpovprečno število zarodkov, ki jih praviloma prenašamo 5. dan po aspiraciji oocitov, na razvojni stopnji blastociste. Pri maloštevilnih zarodkih pa se dokaj pogosto razvoj zarodkov v in vitro pogojih zaustavi, tako da peti dan ni več zarodkov primernih za prenos.

Menimo, da bi se vsaj nekateri in vitro razvojno zaustavljeni zarodki, v in vivo pogojih normalno razvijali in nidirali. Namen raziskave je primerjava uspešnost postopkov zunajtelesne oploditve pri bolnicah s slabim odzivom na stimulacijo ovulacije (manj kot 4 pridobljene jajčne celice), če zarodek ali zarodka prenesemo 3. ali 5. dan.

Do sedaj smo v raziskavo vključili 38 bolnic, ki so ustrezale vključitvenim kriterijem, kar je nekoliko manj kot smo sprva načrtovali. To lahko pripišemo predvsem strogim vključitvenim kriterijem, ki zagotavljajo objektivnost načrtovane raziskave. V letošnjem letu predvidevamo vključitev še preostalih 12 bolnic, zaključek vstopa v raziskavo in dokončno analizo pridobljenih podatkov.

70244 Nova metoda ocenjevanja morfologije spermija in vnos mrfološko čim bolj normalnega spermija (IMSI): doc.dr. Branko Zorn, dr.med.

V laboratoriju za OBMP KO za reprodukcijo UKC Ljubljana izvajamo metodo ISMSI pri pacientih z najhujšimi oblikami moške neplodnosti od meseca marca 2009. Uvedli smo novo klasifikacijo morfologije spermija, ki jo rabimo v praksi. Ugotavljamo, da z metodo IMSI rezultate metode ICSI na splošno izboljšamo. Metoda IMSI je učinkovita predvsem pri parih s hudo teratozoospermijo, s povečano žensko starostjo in s tremi oz. več neuspešnimi postopki klasične metode ICSI. V prispevku za kongres ESHRE poročamo o 23 postopkih IMSI. Računamo, da naslednjih 27 postopkov bomo dokončali v 2. trimesečju leta 2010.

Objave:

- Irma Virant-Klun, Katja Knez, Branko Zorn, Sašo Drobnič, Tomaž Tomaževič, Eda Vrtačnik-Bokal (2009) Selekcija spermijev za ICSI na podlagi njihove morfologije- Sperm selection before ICSI depending on their morphology. In: Premagovanjemoške neplodnosti: napredek in novi izzivi-Overcoming Male Infertility: Progress and New Challenges. (2009) Zorn, B. in Vrtačnik Bokal, Eda. (ur). pp. 15-21.

- K. Knez, I. Virant-Klun, B. Zorn, T. Tomaževič, E. Vrtačnik-Bokal. (2009) Nova klasifikacija morfologije spermijev pred ICSI pod 6000-kratno povečavo. In: Zbornik prispevkov 4. Kongresa Ginekologov in Perinatologov Slovenije z mednarodno udeležbo. Portorož, 11.-13. November 2009

70245 Primerjava uspešnosti zdravljenja neplodnosti zaradi varikokele s postopkom OBMP ali z

Objave:

- Zorn B, Ihan A, Prezelj M, Kopitar AN, Kolbezen M, Vrtačnik-Bokal E. (2009) Apoptoza spermijev in antioksidativna moč semena pri diagnostiki moške neplodnosti-Sperm apoptosis and seminal antioxidant power in the diagnosis of male infertility. In: Premagovanje moške neplodnosti: napredek in novi izzivi-Overcoming Male Infertility: Progress and New Challenges.

(2009) Zorn, B. in Vrtačnik Bokal, Eda. (ur). pp. 74-79.

Služba za medicinske dejavnosti skupnega pomena

70138 Nekateri dejavniki tveganja pri uporabnicah hormonskega nadomestnega zdravljenja;

prof.dr.Ksenija Geršak,dr.med.

Skupna incidenca ginekoloških rakov (maternično telo, jajčnik) in raka dojke je v Sloveniji približno 1500 na leto (Register raka za Slovenijo). Med nekaterimi znanimi dejavniki tveganja so zgodnja prva menstruacija, kasna prva nosečnost in pozna menopavza. Njihov skupni imenovalec je izpostavljenost steroidnim hormonom estrogenom, ki so endogeni in tudi eksogeni. Eden od načinov vnosa v telo je hormonsko nadomestno zdravljenje (HNZ) v peri- in postmenopavzi. Možni mehanizmov njihovega karcinogenega delovanja je nastajanje večjih koncentracij nekaterih metabolitov v procesu inaktivacije.

Glede na protokol in vključitvene kriterije smo vsaki preiskavanki pri prvem pregledu odvzeli vzorce krvi in urina, naredili UZ pregled in jim predpisali enotno estrogensko terapijo. Po treh mesecih smo jih aktivno povabili na drugi pregled, ponovno vzeli vzorce krvi, urina in ponovili UZ. Vse vzorce smo sproti shranjevali v hormonskem labiratoriju KIKKB. V letu 2009 smo pričeli tudi z analizami zmrznjenih vzorcev. Določali smo serumske koncentracije E2, E1, prolaktina, FSH, LH, T, SHBG in DHEA, v urinskih vzorcih pa kreatinin 2-0H-E in 16alfa-E1. Po predvidenem načrtu izvedbe projekta bomo z vključevanjem in analizami nadaljevali do konca leta 2010.